微生物DNA抽提試劑盒基礎操作要點

來源：北京締一生物科技有限公司 2026年08月06日 15:35

　　微生物DNA抽提試劑盒是從細菌、真菌等微生物中高效分離純化DNA的標準化工具，核心通過細胞裂解、雜質去除、硅膠膜/磁珠特異性吸附三步完成純化，產物可直接用于PCR、宏基因組測序等下游實驗。

　　一、實驗前準備

　　提前確認試劑盒內試劑齊全無破損，將蛋白酶K置于-20℃暫存，其余試劑常溫放置。

　　準備好無菌離心管、移液器槍頭，用75%乙醇擦拭超凈臺臺面，避免外源DNA污染。

　　提前配置好含RNase A的BufferA1，備好1-5mL過夜培養的微生物菌液樣本。

　　二、微生物DNA抽提試劑盒核心操作步驟

　　樣本處理：將菌液12000rpm離心后棄盡培養基，加入250μL BufferA1，通過漩渦震蕩充分懸浮菌體沉淀。

　　充分裂解：加入250μL BufferA2，溫和翻轉離心管4-6次，保證菌體裂解。

　　雜質沉淀：加入350μL BufferA3，最高速12000rpm離心10min，去除蛋白、細胞碎片等不溶雜質。

　　核酸結合：將上清液全部轉移至核酸純化柱，離心后棄去濾液，讓DNA特異性結合在硅膠膜上。

　　洗滌除雜：依次加入500μL BufferW1、含乙醇的洗滌緩沖液，兩次離心去除殘留鹽類和雜質。

　　洗脫收集：將純化柱轉移至潔凈1.5mL離心管，在膜中央加入60-100μL BufferEB，室溫靜置1min后離心，收集得到純化的微生物DNA。

　　三、關鍵操作要點

　　樣本量嚴格控制：菌液沉淀不可超過試劑盒推薦上限，避免裂解不充分，超量樣本需分次處理。

　　動作保持輕柔：裂解、洗滌步驟避免劇烈震蕩，防止高分子量DNA發生剪切斷裂。

　　除盡殘留乙醇：洗滌后需空柱離心2-3min干燥硅膠膜，避免乙醇殘留導致后續PCR等下游實驗失敗。

　　提升洗脫效率：將洗脫緩沖液預熱至65℃，可大幅提高DNA的洗脫得率。

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