【2025藥典】兩款迪馬色譜柱助力外用人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠的檢測

迪馬液相色譜柱

在中國藥典生物制品檢測中的應用

——外用人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠

外用人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠（rhGM-CSF凝膠）系由重組大腸埃希菌表達、純化后加入凝膠基質及輔料制成的外用制劑。2025年版《中國藥典》三部收載該品種質量標準，涵蓋生物學活性、鑒別、純度、抑菌劑含量、裝量及無菌檢查等項目，其中純度檢查與抑菌劑含量測定屬液相色譜控制的關鍵質量項目。

純度檢測采用體積排阻色譜（SEC）進行分子大小變異體分析，其難點在于：重組蛋白高級結構與活性密切關聯，SEC需在溫和生理條件下運行，對填料惰性與生物相容性要求 ji gao；凝膠基質中羧甲基纖維素鈉、甘油、聚山梨酯80等輔料易產生非特異性吸附或共洗脫，干擾測定準確性；SEC柱裝填工藝及孔徑均一性決定理論塔板數，該指標系藥典系統適用性的硬性要求。

抑菌劑檢查針對該品種wei yi抑菌劑對羥基苯甲酸甲酯，藥典規定采用反相液相色譜法。挑戰在于：目標物含量低（約1μg/mL），屬痕量檢測，基質中高濃度輔料易產生干擾，對色譜柱選擇性與分離度要求較高；對羥基苯甲酸甲酯極性較弱，其在C18柱上的保留行為與峰形對封端技術和硅膠純度敏感，直接影響積分準確性與定量可靠性。

針對上述難點，迪馬科技分別選用兩款色譜柱進行方法重現：Dikma Protein SEC-400 5μm 300 x 8.0mm(Cat.#:99315)用于純度分析，主峰理論塔板數約20390；Diamonsil^® C18(2) 5μm 250 x 4.6mm(Cat.#: 99603)用于抑菌劑檢查，目標峰形對稱，理論塔板數大于15000。結果表明，兩款色譜柱均wan quan man zu 藥典系統適用性要求，為國產色譜柱在該品種質量控制中的應用提供了實驗依據。

按照2025版《中國藥典》三部外用人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠項下方法，使用Dikma Protein SEC-400 5μm 300 x 8.0mm（Cat.#:99315）進行純度分析，人粒細胞巨噬細胞刺激因子色譜峰理論塔板數在2萬左右，能夠滿足分析要求。

取市售外用重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠適量，加流動相稀釋制成每1mL中含1mg的溶液作為供試品溶液。

色譜柱：Dikma Protein SEC-400 5μm 300x8.0mm（Cat.#:99315）

流動相：0.1mol/L磷酸鹽-0.1mol/L氯化鈉緩沖液^*

流速：1mL/min

進樣量：50μL

柱溫：30℃

檢測波長：280nm

儀器：島津LC-2040C

^*注：取磷酸氫二鈉10.3g、磷酸二氫鈉3.36g與氯化鈉2.92g，加水1000mL使溶解，調節pH值至7.0

按照2025版《中國藥典》三部外用人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠的純度分析方法，使用Dikma Protein SEC-400 5μm 300x8.0mm（Cat.#:99315）進行實驗，人粒細胞巨噬細胞刺激因子色譜峰保留時間約34.5分鐘，理論板數為20390，能夠滿足分析要求。

按照2025版《中國藥典》三部外用人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠項下方法，使用Diamonsil^® C18(2) 5μm 250 x 4.6mm(Cat.#: 99603)進行對羥基苯甲酸甲酯的檢查實驗，對羥基苯甲酸甲酯色譜峰峰形對稱，理論板數大于15000，能夠滿足分析要求。

對照品溶液：取對羥基苯甲酸甲酯對照品適量，加流動相溶解稀釋成濃度為1μg/mL的溶液。

供試品溶液：取市售外用重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠適量，加流動相溶解并稀釋制成每1mL中含對羥基苯甲酸甲酯1μg的溶液。

色譜柱：Diamonsil^® C18(2) 5μm 250 x 4.6mm(Cat.#: 99603)

流動相：甲醇-1%冰醋酸（60∶40）

流速：1mL/min

進樣量：20μL

柱溫：30℃

檢測波長：254nm

儀器：島津LC-2040C

按照2025版《中國藥典》三部外用人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠中對羥基苯甲酸甲酯的分析方法，使用Diamonsil^® 5μm C18(2), 250 x 4.6mm(Cat.#: 99603)進行實驗，對羥基苯甲酸甲酯色譜峰保留時間約4.8分鐘，理論板數大于15000，能夠滿足分析要求。